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      干貨!高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒的分離鑒定及遺傳變異研究

      http://www.ts636.com 貴州大學動物科學學院 2019-08-21 15:48 右右 網友評論 |

        引言

        自2006年暴發高致病性豬以來,我國多地陸續報道PRRSV變異株的存在,童光志等證明了PRRSV變異株以Nsp2發生30個氨基酸的不連續缺失為特征。PRRSV被分為以1991年荷蘭分離的Lelystad Virus(LV)株為代表的歐洲型(又稱基因Ⅰ型)毒株和以1992年美國分離的ATCC VR-2332株為代表美洲型(又稱基因Ⅱ型)毒株2個基因型。不同基因型的PRRSV基因組差異高達40%,尤其是Nsp2基因和ORF5基因變異較大,并且HP-PRRSV Nsp2基因序列高度變異,Nsp2蛋白具有糜蛋白酶樣(或小RNA病毒3C樣)半胱氨酸蛋白結構域,擁有大量線性B細胞表位,具有較強的免疫原性,能在病毒感染期間激發機體產生特異性抗體,是PRRSV的免疫原之一。GP5蛋白在病毒感染與免疫過程中起到重要的作用,在病毒分子遺傳變異分析中ORF5序列也作為基因分型依據,不同國家和地區HP-PRRSV分離株的ORF5基因同源性差異較大,給該病的防控帶來更大挑戰。因此,對ORF5和Nsp2基因序列進行分析在一定程度上可以反映整個病毒基因組序列的變異情況,在研究上常作為比較PRRSV變異的靶基因。本研究從貴州省發病豬群中分離PRRSV,對其ORF5和Nsp2基因進行遺傳變異分析,從分子生物學的角度分析貴州省流行毒株與其他毒株間的關系及變異情況,進一步探索貴州地區PRRSV的遺傳特點、演化趨勢以及PRRSV 高變異的特性,將為今后HP-PRRS的防控提供理論依據。

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        材料與方法

        利用實驗室所建立的豬呼吸和繁殖障礙類病毒性疫病多重PCR檢測方法對2017年以來貴州9個不同地區采集的150份病料進行檢測,對PRRSV檢測為陽性的病采用細胞接毒培養技術、病毒的形態結構觀察、間接免疫熒光試驗和RT-PCR擴增測序等分離鑒定了5株高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒,分別命名為GZ-Fq、GZ-Bj、GZ-Kl、GZ-Hz和GZ-Zy株,并對這5株PRRSV的ORF5和Nsp2基因的核苷酸和氨基酸序列進行差異性分析。

        結果與討論

        病料經過處理分別接種Marc-145細胞并盲傳3~5代,RT-PCR均能擴增出PRRSV的特異性條帶;病毒粒子在電鏡下呈球形或卵圓形,直徑約30~80 nm;5株毒株與近年來國內各地流行的HP-PRRSV同源性較高,分別為96.2%~100%和97.1%~98.6%,其中,ORF5基因的第13位氨基酸均為精氨酸(R),第137位氨基酸均為絲氨酸(S),Nsp2基因的氨基酸均存在第481位和532~560位氨基酸2處不連續的缺失位點;其ORF5基因及Nsp2基因均與2008年之后流行的高致病性繁殖與呼吸綜合征親緣關系較近。由此可見,貴州省豬高致病性繁殖與呼吸綜合征病毒發生了變異,和近年來國內各個地區的高致病性繁殖與呼吸綜合征病毒序列的變異位點一致,屬于美洲型PRRSV的變異株,該研究結果為貴州HP-PRRSV流行病學的研究提供了參考資料。

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